近年來驢精液低溫冷凍過程中所用到的單層密度梯度離心法、稀釋液配方以及人工授精技術等對母驢(馬)受胎率的影響，在為驢精液冷凍保存技術和提高其受胎率的研究提供科學參考。

冷凍精液配種具有高效利用優(yōu)良種公畜，不受時間與地域限制，不受種公畜生命限制等優(yōu)勢。牛的冷凍精液是研究最早且最成功的，而驢的冷凍精液還處在試驗研究階段。據(jù)報道，用種公驢冷凍精液配2匹母馬，受胎1匹;而國內最早的相關研究是在1973年，易理輝等研究發(fā)現(xiàn)，驢冷凍精液配母馬的平均情期受胎率為52.3%，達到鮮精水平，填補了我國驢精液冷凍的空白。液氮罐

驢精液的低溫冷凍保存技術分析

1.鮮精離心方法(單層密度梯度離心法)馬、驢精液不同于牛，其精子密度較低，一般為2×108～3×108個/mL，精液中大部分的物質為精清，精清可為精子提供營養(yǎng)物質，并促進精子成熟;但是體外保存精液時，由于精清中具有促使精子提前獲能的物質，會縮短精子體外存活時間。因此，驢精液冷凍保存時需要將精液離心，去除大量精清。目前，一般采用

22℃下離心力400～600g離心10～15min的常規(guī)離心法。近年來，研究者們正在探索更高效的離心方法，如單層密度梯度離心法(SLC)。

單層密度梯度離心法是將樣品加入到惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。研究表明，使用該方法離心公馬精液可以獲得更好的精子活力、質膜完整性及 DNA 完整性等，從而提高其受孕能力。受此啟示，2012 年至今，I.Ortiz 等一直致力于驢精液單層密度梯度離心法的研究，并發(fā)現(xiàn)在進行離心處理前向精液中加入Equipure TM或Androcoll-E-Large，尤其是后者，可以大大改善驢冷凍精液的運動參數(shù)、生存能力及細胞形態(tài)等，下一步將探索該方法是否可以提高母驢受胎率。液氮罐

2.稀釋液配方

稀釋液一般包括基礎稀釋液和冷凍稀釋液，其配方須滿足以下條件：

(1)、對精子無毒害作用;

(2)、能供給精子營養(yǎng);

(3)、酸堿環(huán)境適合精子生存;

(4)、滲透壓適當;

(5)、原料價格合適、配制方便。配方成分一般含有葡萄糖、卵黃、甘油、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸、青霉素、鏈霉素等。按功能可分為營養(yǎng)供給劑、低溫保護劑、冷凍保護劑、pH值緩沖劑、抗生素等。