關(guān)于液氮罐冷凍細胞的那些事
實驗室里，細胞的長期使用也需要長期冷凍保存，以便于長期保存，需要的時候取出來。使細胞復(fù)蘇，就是讓冬眠的細胞復(fù)蘇起來?；貜?fù)其生命活力

　　其實，細胞凍存技術(shù)和復(fù)蘇技術(shù)已經(jīng)不是什么高科技，不過這里面還有很多小的注意事項和流程方面需要的細節(jié)的。

　　一、冷凍越慢越好，復(fù)蘇越快越好

　　高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀，一切由機器代勞，普通實驗室就需要人工實現(xiàn)預(yù)凍的過程了，不過，細胞冷凍越慢越好，寧慢勿快。做細胞冷凍前，事先留出充足的時間。

　　而復(fù)蘇速度越快越好：從液氮罐里取出來之后，迅速放在37°C水浴中，然后使勁搖呀搖，令其盡快融化。

　　二、高高興興上班，平平安安回家

　　細胞凍存和復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分，凡是和液氮罐接觸的操作，注意戴保護眼鏡和手套。最需要小心的是：復(fù)蘇的時候，在水浴中搖呀搖的時候，有時候小瓶會爆炸的。所以，一定要戴保護眼鏡和手套。

　　細胞凍存液中的DMSO是有毒致癌的，接觸的時候一定一定要帶好手套。

　　三、凍存細胞數(shù)量要足夠

　　無論再怎么小心，細胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的。所以，一開始凍存細胞的數(shù)量要足夠。一般最低要達到5×106／毫升，一瓶不夠兩瓶湊。但是，這個不能一概而論。有些細胞，比如：雜交瘤細胞，只需要1－3x106／毫升。

　　四、做好標(biāo)記

　　把培養(yǎng)瓶放入提手，末端應(yīng)該扎有小牌，注明主人的名字，細胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱，代數(shù)和凍存日期。

　　實驗室的液氮罐都是公用的，每個人應(yīng)該有屬于自己的提手。毛博當(dāng)年就發(fā)生過為了找自己的細胞，被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇。

　　五、細心呵護

　　剛剛復(fù)蘇的細胞就象剛剛出生的baby，非常脆弱，需要我們的細心呵護。培養(yǎng)液要事先在培養(yǎng)箱或者水浴中復(fù)溫，一切的和細胞接觸的動作都要輕柔。

　　把細胞從凍存管里吸出來，注入離心管，要輕輕地吸取和滴加。包括給離心管補加培養(yǎng)液的時候，都要輕輕地滴加。離心要用低速離心（500－1000轉(zhuǎn)／分鐘），吹打要用專用的吹打管，而不要圖方便用移液槍，吹打也要輕輕的。

　　六、DMSO的問題

　　上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么，解凍之后，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢？答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細胞外，99％的細胞都不需要去除DMSO，解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。

　　七、物離鄉(xiāng)貴，人離鄉(xiāng)賤

　　解凍后的細胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清。因為每一種細胞都有自己特定的，并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清，會造成細胞生長不良，甚至死亡。這和一個人突然離家千里，會水土不服是一樣的道理。

　　細胞培養(yǎng)離不開人。毛博還記得當(dāng)年當(dāng)實驗狗的時候，放個長假都要惦記著培養(yǎng)箱里面的細胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù)，就可以解決這個問題。春節(jié)回家前把細胞都凍上，過了年回來再開干。